opar

Diagnóza herpes, ktoré testy prejsť?

Infekcia genitálnych herpesu (HSV, HSV) je rozšírená na celom svete a epidemiologické štúdie ukazujú nárast mier infekcie všade. Genitálny herpes je jednou z príčin ulceróznych lézií pohlavných orgánov. Herpesová infekcia je vyvolaná typmi HSV 1 alebo HSV 2. Väčšina prípadov genitálneho herpesu je spojená s HSV-2, ale tiež sa uvažuje s infekciou a HSV 1. Klinický obraz prvej epizódy genitálneho herpesu u pacientov s HSV-1 a HSV-2 infekciami je podobný, frekvencia a závažnosť relapsu je menej pri HSV-1 ako pri HSV-2. Okrem toho je závažnosť prvej epizódy a reaktivácia s infekciou HSV-2 nižšia u pacientov s predchádzajúcim HSV-1. Treba poznamenať, že väčšina herpetických infekcií je asymptomatická alebo nediagnostikovaná. Herpetická infekcia sa môže javiť ako atypická, čo sťažuje diagnostiku. Väčšina prípadov prenosu vírusu na partnera alebo z matky na novorodenca sa vyskytuje bez klinických príznakov. Boli vykonané štúdie, ktoré preukázali, že HSV zvyšuje riziko infekcie HIV. Antivírusová terapia znižuje klinické prejavy HSV, čo významne znižuje riziko prenosu.

Je dôležité

Diagnostikovanie herpesu je dôležité pre určenie taktiky manažmentu, ale herpesové testy nie sú zahrnuté do skríningových štúdií..

Existuje mnoho spôsobov na detekciu HSV a klinická diagnostika genitálneho herpesu by mala byť vždy podporená laboratórnymi testami, vrátane sérotypov, pretože sérotyp ovplyvňuje prognózu aj liečebný režim.. Konečná diagnóza genitálneho herpesu je stanovená na základe vizualizácie špecifických znakov v genitálnej oblasti s uvoľnením vírusu alebo s detekciou antigénu. V niektorých laboratóriách nahrádza detekcia HSV DNA použitím molekulárnych diagnostických metód izoláciu vírusovej kultúry a diagnostiky ELISA. Sérologické testy sa vykonávajú u pacientov so symptómami herpetickej infekcie, keď priame metódy vykazujú negatívne výsledky, pri absencii symptómov a na určenie infekcie v minulosti alebo súčasnosti.. 

Nasledujúce aspekty ovplyvňujú výsledky laboratórnej diagnostiky HSV:

  • typ skúšky;
  • kvalita vzorky,
  • laboratórne schopnosti;
  • interpretácia výsledkov.

Priame metódy

Vzorky získané z vezikulárnych lézií počas prvých 72 hodín od ich výskytu majú veľkú diagnostickú hodnotu. Iné biomateriály z predchádzajúcej lézie alebo štúdia genitálnych škvŕn sa vykonáva, ak existuje vysoké riziko HSV. Ak sa na pozadí hojenia objavia kôry, pravdepodobnosť zistenia HSV je výrazne znížená. Použitie agresívnych činidiel na dezinfekciu lézií môže inaktivovať vírus. Liečba alginátom vápenatým je škodlivé pre HSV, a preto sa neuplatňuje..

Je dôležité

Priame testy potvrdzujú prítomnosť HSV v podozrivom zameraní alebo sekréciách z pohlavných orgánov. V ideálnom prípade sa analyzuje vzorka z vezikuly, ktorá sa objavila pred menej ako 24 hodinami..

Ak je veľa bublín, odsajte obsah niekoľkých. Podľa štúdií je citlivosť analýzy nižšia u pacientov s rekurentnými léziami ako u pacientov s prvými epizódami.

V niektorých prípadoch môže elektrónová mikroskopia tekutého biomateriálu poskytnúť pozitívny výsledok. Tento postup, hoci je rýchly, je pomerne necitlivý a pozitívne výsledky sa objavujú iba pri vonkajších léziách (vyrážka na stehnách alebo stehnách, menej často na slizniciach). Je výhodné, aby sa analýza tekutiny z celej vezikuly použila pomocou tuberkulínovej injekčnej striekačky, zatiaľ čo aspiracia obsahu postačuje..

Kvapka sa suší na vzduchu a skúma sa mikroskopom..

Niektoré laboratóriá používajú molekulárne metódy na detekciu a typovanie HSV. Vzorky odobrané na izoláciu alebo detekciu antigénu sú vhodné aj na metódy detekcie DNA. Zvýšená citlivosť diagnostiky PCR založená na amplifikácii nukleových kyselín v porovnaní s inými priamymi metódami (detekcia kultúry alebo antigénu) umožňuje analyzovať materiál s minimálnym počtom patogénnych častíc.

Štandardná vírusová kultúra

Výsev na živnom médiu je zlatým štandardom na detekciu HSV, špecifickosť je 100% pre HSV-1 a HSV-2, citlivosť závisí od štádia infekcie herpes a od času príjmu vzorky.

Citlivosť sa pohybuje od 75% v prípade prvých epizód až po 50% pri relapsoch..

RIF v herpes

Detekcia antigénu HSV farbením s roztieradlami DFA (fluorescencia) môže poskytnúť rýchle stanovenie bunkovej kultúry. Je dôležité, aby sa pre túto analýzu získala vysokokvalitná vzorka; v tomto režime môže citlivosť testu dosiahnuť 90%, najmä počas počiatočnej infekcie.

Materiál je zafarbený špeciálnou fluorescenčnou látkou, po ktorej nasleduje mikroskopia.

Detekcia vírusového antigénu je alternatívou ku kultúrnemu diagnostickému postupu, ktorý môže pomôcť, ak v prípade nesprávneho spracovania a transportu vzoriek môže byť akýkoľvek vírus inaktivovaný. 

Na potvrdenie HSV je citlivosť testu podobná alebo vyššia ako citlivosť metódy kultivácie..

Detekcia HSV antigénov je možná pomocou testov DFA alebo imunoperoxidázových testov na pevných a ošetrených bunkových vzorkách.. 

Dzank smear

Herpetická infekcia spôsobuje typické cytopatické zmeny genitálnych epiteliálnych buniek). Zvyšujú sa vo veľkosti, objavujú sa intranukleárne inklúzie a mnohonásobné bunky sa často vizualizujú. Po špeciálnom zafarbení sa vzorky skúmajú pomocou svetelného mikroskopu..

Nevýhody: táto metóda má nízku citlivosť a nerozlišuje medzi HSV-1 a HSV-2. Okrem toho podobný obraz môže byť napríklad s ovčími kiahňami.

Na potvrdenie diagnózy sú potrebné citlivejšie testy..

Elektrónová mikroskopia

Priama štúdia vezikulárnej tekutiny alebo iného klinického materiálu pomocou elektrónovej mikroskopie na diagnostikovanie HSV je obmedzená skutočnosťou, že morfológia vírusu tiež neumožňuje odlíšiť HSV od iných herpes vírusov (napríklad vírus varicella-zoster). Táto tradičná metóda bola vo veľkej miere nahradená fluorescenčným farbením škvŕn, ktoré poskytlo špecifický typ diferenciácie pre HSV-1 a HSV-2.

Detekcia vírusu DNA

Vírusová DNA sa môže detegovať hybridizačnými metódami použitím rádioaktívne značených alebo biotinylovaných vzoriek. Tieto metódy boli vo veľkej miere nahradené citlivejšími a menej časovo náročnými štúdiami, ktoré využívajú amplifikáciu cieľovej HSV DNA pomocou polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). Špecifickosť amplifikačnej metódy sa poskytuje buď vykonaním opakovanej PCR diagnostiky s cieľovými špecifickými primérmi, alebo pomocou HSV-špecifickej hybridizácie so zosilnenými produktmi..

V prípade možného genitálneho herpesu PCR detekuje vírusovú DNA do niekoľkých dní po tom, čo lézia neobsahuje ukážkový infekčný vírus. To znamená, že diagnostická metóda založená na amplifikácii nukleovej kyseliny môže priniesť pozitívny výsledok aj vtedy, keď sa objavilo symptomatické zotavenie a liečba už nie je potrebná..

Výsledky negatívneho očkovania sú zvyčajne potvrdené diagnostikou PCR. Citlivosť PCR je vyššia ako štandardná kultúra. Výskyt PCR v reálnom čase minimalizoval riziko falošne pozitívnych výsledkov.. 

Nepriame sérologické analýzy

Približne 8-10 ml krvi sa zhromažďuje v skúmavke bez antikoagulantu alebo konzervačných látok. Po koagulácii pri izbovej teplote sa sérum odstredí a umiestni do inej skúmavky. Ak je skladovanie potrebné niekoľko týždňov, sérum sa ochladí na 4 ° C alebo sa zmrazí pri teplote nižšej ako -20 ° C. Neodporúča sa zmraziť celú krv v dôsledku hemolýzy, čo spôsobí, že vzorka nebude vhodná na sérologické testovanie..

Analýza na detekciu protilátok proti HSV je predpísaná v prípade, že iné virologické štúdie nemožno vykonať alebo poskytnúť negatívne výsledky). To platí najmä pre asymptomatickú infekciu..  

Sérologické testy na HSV sa môžu použiť v nasledujúcich prípadoch:

  • štúdium prenosu herpesovej infekcie na partnera;
  • prvá epizóda infekcie, najmä u tehotných žien;
  • recidivujúca HSV;
  • nezrovnalosti,
  • plánovanie tehotenstva (človek je pozitívny, žena je negatívna);
  • Zaťažená pôrodnícka a gynekologická anamnéza s podozrením na herpes infekciu;
  • skríningu ITS;
  • screening u HIV-infikovaných pacientov na detekciu HSV-2.

Hoci mnohé sérologické testy zisťujú protilátky proti HSV, nie je možné stanoviť špecifický typ (1 alebo 2).

Existuje úzka sérologická väzba medzi HSV-1 a HSV-2, z ktorých každý kóduje sérologicky odlišný glykoproteín G (gG-1 a gG-2). Tento rozdiel sa použil pri vývoji sérologických testov špecifických pre určitý typ.. 

ELISA, imunoblotovanie

Imunoblotting (WB) je štandard pre detekciu protilátok proti HSV. Testy majú vysokú citlivosť a schopnosť rozlíšiť protilátky proti HSV-1 a HSV-2. Reakcia nastáva pri uvoľňovaní pevných proteínových matríc ("blotov") z lyzátov buniek HSV-1 alebo HSV-2.

Najväčšou diagnostickou hodnotou je definícia protilátok IgM, ktoré sa objavujú približne 2 týždne po infekcii alebo sú prítomné v krvi počas chronickej infekcie alebo jej aktivácie.

IgG je určená dlhodobou existenciou infekcie v tele alebo keď je aktivovaná.

Je dôležité

Metóda ELISA môže byť kvantitatívna (stanovenie titra protilátok, vyššia, ostrosť procesu) a kvalitatívne (prítomnosť vírusu, typu, protilátok, predchádzajúcich relapsov).

Detekcia protilátok na proteíny predanimnyh vírusu pomáha posúdiť dĺžku procesu.

Dešifrovanie analýzy ELISA pre herpes:

  • IgM "-", IgG na "+" predawn proteíny, IgG neskoré "+" / primárna akútna infekcia alebo jej recidíva.
  • IgM "-, IgG na predčasné proteíny" - ", IgG neskoré" + ") majú imunitnú odpoveď na herpes vírus (nosič).
  • IgM "+", IgG na "+" predbežné proteíny, neskoré IgG "-" / primárna akútna infekcia.
  • IgM "+", IgG na "+" predbežné proteíny, IgG neskorá "+" / primárna akútna infekcia.
  • IgM "-, IgG k predčasným proteínom" - ", IgG late" - "/ norma, čo naznačuje absenciu patologického procesu.

Testovanie odolnosti

Existuje množstvo antivírusových liekov na liečbu HSV infekcií; väčšina z nich je predpísaná acyclovir. Odolnosť HSV voči acykloviru rastie a takmer všetky klinicky významné kmene rezistentné na acyklovir sú diagnostikované u imunokompromitovaných pacientov, najmä u tých, ktorí sú infikovaní vírusom HIV. Vývoj rezistencie sa zvyčajne vyskytuje ako výsledok mutácií vo vírusovom genóme a prítomnosť selektívneho účinku liečiva vedie k stabilnej populácii vírusov. Izolácia HSV z pretrvávajúcich lézií, napriek dostatočným dávkam, je podozrivá z rezistencie na Acyclovir.

Aké ochorenia sa používajú na diferenciálnu diagnostiku herpesu?

Diferenciálna diagnostika sa uskutočňuje s nasledujúcimi patologickými stavmi:

  • Bechtechov syndróm (neinfekčná vaskulitída, charakterizovaná orogénnymi aftóznymi vredmi, poškodenie kože a očí a postihnutie CNS, gastrointestinálneho traktu a kĺbov);
  • kandidóza;
  • mäkký chancre;
  • Vírus Coxsackie;
  • herpes zoster;
  • syfilis;
  • Crohnova choroba;
  • niektoré dermatózy;
  • inguinálny granulóm atď..

Mišina Victoria, urolog, lekár